微生物革兰氏染色培训

       2021年10月23日，微生物室进行了革兰氏染色的培训。通常在一些实验过程中我们会通过革兰氏染色在显微镜下观察是否为目标菌落。然而在革兰氏染色过程中也会遇到很多问题可能会导致假阳性或者假阴性。在这次培训中我们一起交流了平时操作的心得与值得注意的事项。

首先革兰氏染色大致分为以下8个步骤：

       1、涂片

       液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近５厘米左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径２毫米左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

       固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

       2、晾干：让涂片在空气中自然干燥。

       3、固定：让菌膜朝上，通过火焰２－３次固定（以不烫手为宜）。

       4、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染１分钟。

       5、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

       6、媒染：滴加１滴碘液，染１分钟，水洗。

       7、脱色：吸去残留水，连续滴加９５％乙醇脱色２０－３０秒至流出液无紫色，立即水洗。

       8、复染：滴加蕃红复染３－５分钟，水洗。至此，革兰氏染色结束。

注意事项：

       １、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

       ２、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

       ３、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。

供稿人：韩俊